CAS:9015-85-4,T4 DNA连接酶

英文名称：T4  Ligase 

 CAS号：9015-85-4

分子量：55.3kDa，单体

级别：BR

来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌

活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为NorIT(http://www.maoyihang.com/sell/l_25/)可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda  产物所需的酶量） 

抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4  Ligase活性

失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟

注意：T4  Ligase与结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司(http://www.maoyihang.com/company/)6× Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用抽提方法除去连接混合物中的T4  Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物

质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端的连接能力

CAS:9015-85-4,T4 DNA连接酶 性状(以下信息供参考)：液体。该酶催化双链或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链、RNA或/RNA复合体中的单链切口，连接的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP

用途：本品供科研，不得用于其它用途。(以下用途供参考)粘性末端或平末端双链的连接；双链寡核苷酸接头与双链连接；双链、RNA或-RNA复合体中缺口的修复；连接酶介导的RNA检测；位点特异性突变；扩增片段长度多态性

保存： -20°C

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